Th1/Th2/Th17細(xì)胞因子檢測(cè)應(yīng)用方案
來源：時(shí)間：2014-11-14
建議檢測(cè)指標(biāo)
Th1/Th2/Th3/Tfh/Th17/Treg相關(guān)因子
IFN-γ、IL-2、IL-4、 IL-5、IL-6、IL-7、IL-10/CSIF、IL-12/IL-23 p40、IL-12 p70、IL-13、IL-17A/CTLA-8、IL-17F/ML-1、IL-21、IL-22/IL-TIF、TGF-beta 1、TSLP
檢測(cè)目的： 檢測(cè)免疫狀態(tài)，觀察疾病進(jìn)程，判斷預(yù)后，輔助診斷，藥效評(píng)價(jià)等。
應(yīng)用舉例：
藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)：
用小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞，經(jīng)炎癥激發(fā)因子（LPS）誘導(dǎo)建立了巨噬細(xì)胞炎癥模型。在該模型中可通過測(cè)定被篩選化合物抑制IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ各細(xì)胞藥因子表達(dá)的程度來評(píng)價(jià)化合物的抗炎活性。本試驗(yàn)所建立的藥物篩選模型是一種靈敏、高效、可靠、適于高通量抗炎藥物篩選的細(xì)胞模型。
試驗(yàn)方法：
1．樣本制備：接種106小鼠巨噬細(xì)胞至每孔培養(yǎng)，分為空白組和LPS實(shí)驗(yàn)組； LPS實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用LPS刺激24小時(shí)后， 分別加入不同濃度（分別為10-5 mg/ml, 10-6mg/ml, 10-7 mg/ml）的1# 和2#號(hào)藥物，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，收集各細(xì)胞培養(yǎng)上清15000 RPM，離心10min，取上清-80保存?zhèn)溆谩?/span>
2. 檢測(cè)步驟： 用 Ainplex ?MouseTh1/Th2/Th17 7-plex檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。加入45ul 捕獲微球混懸液入96孔板，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋樣本45ul，室溫避光孵育1h，洗滌后加入25ul生物素偶聯(lián)的檢測(cè)抗體，室溫避光孵育30min，洗滌后加入25ul鏈霉親和素標(biāo)記的PE工作液，洗滌后加入 150 ul 洗液，重新懸浮微球。使用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。
3. 結(jié)果分析：用FCAP Array軟件分析各個(gè)因子檢測(cè)數(shù)據(jù)，分析IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ各因子變化趨勢(shì)，篩選炎癥抑制效果理想藥物及其濃度。
各樣本中不同細(xì)胞因子含量結(jié)果圖
結(jié)論：
1.小鼠巨噬細(xì)胞用LPS刺激后IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ均有一定程度的增高，其中TNF-α，IL-6，IL-10，IFN-γ較為明顯。
2.1#藥物在10-5,10-6濃度時(shí)，對(duì)各因子均有明顯抑制作用，在10-7濃度時(shí)抑制作用明顯降低。
3.2#藥物在10-5濃度時(shí)，對(duì)各因子均有明顯抑制作用，在10-6濃度時(shí)抑制作用明顯降低，10-7濃度沒有抑制作用。
4.總體結(jié)果1#藥物效果明顯比2#藥物要好，即抗炎效果更有效。
推薦產(chǎn)品及貨號(hào)
PN | Name | Description | Size |
C190010 | Human Th1/Th2 10-plex | IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFalpha | 96 T |
C191107 | Human Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
C191114 | HumanTh1/Th2/Th17 14-plex | IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-17F, IL-22, TNFalpha, TNFbeta | 96 T |
C191118 | HumanTh1/Th2/Th1718-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-17F, IL-22, IL-33, TNFalpha, TNFbeta, TSLP | 96 T |
C281107 | Mouse Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
C281114 | MouseTh1/Th2/Th17 14-plex | IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-22 and TNFalpha | 96 T |
C281118 | MouseTh1/Th2/Th17 18-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-22, IL-23, KC, TNFalpha and TSLP | 96 T |
C281116 | MouseTh1/Th2/Th17 16-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-23, KC, TNFalpha | 96 T |
C371107 | Rat Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
參考文獻(xiàn)：
[1]Bettelli E, Carrier Y, Gao W,et a1.Reciprocal developmental pathways for thegeneration of pathogenic effector Th17 and regulatory T cells．Nature，2006，441(7090)：235-238.
[2]Chen Z，Lin F，Gao Y，et a1.FOXP3 and RORrt：transcriptional regulation of Treg and Th17.IntImmunopharmacol，2011，11(5)：536-542.
[3]Usui T.Transcription factors that regulate helper T celldifferen-tiation.Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi，2007，30(6):4l9-427.
[4]Hartmann P,Plum G.Immunological defense mechanisms in tuberculosis andMAC-infection.Diagn Microbiol Dis,1999,34:147-152.
[5]Appelberg R. Protective role of interferon gamma,tumor necrosis factor alphaand interleukin-6 in mycobacterium tuberculosis and M.aviuminfections.Immunobiology，1994,191(4-5):520.
詳細(xì)信息請(qǐng)點(diǎn)擊：http://free-php-hosting.com/Home/Tpl/Public/Uploads/attach/5466f11eb7937.pdf
